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188宝金博页面版: 【最新2014-2015】全人源食管癌单链抗体scFv基因文库的构建-医学论文

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内容提示: 全人源食管癌单链抗体 scFv 基因文库的构建 【摘要】 目的制备全人源化食管癌单链抗体 scFv 基因文库。 方法取食管癌病人癌肿周围淋巴结作为 B 细胞的来源, 提取总 RNA, 用RTPCR 的方法获得抗体可变区基因 cDNA 文库。 首先分别网格筛选确定扩增 VH 和 VL 基因片段的引物对, 以 cDNA 为模板扩增 VH和 VL 基因 片 段, 再以 它 们 为 模板分 别 扩增 VHlinker 与VLlinker, 用 SOEPCR 技术将它们拼接成 scFv,再引入酶切位点 Sfi I 和 Not I, 胶回收 PCR 产物获得 scFv。 将 scFv 基因克隆入噬菌粒载体 pCANTAB5E 后电转入 Ecoli TG1。 PCR 法鉴...

文档格式:DOC | 页数:14 | 浏览次数:16 | 上传日期:2014-03-24 16:29:33 | 文档星级:
全人源食管癌单链抗体 scFv 基因文库的构建 【摘要】 目的制备全人源化食管癌单链抗体 scFv 基因文库。 方法取食管癌病人癌肿周围淋巴结作为 B 细胞的来源, 提取总 RNA, 用RTPCR 的方法获得抗体可变区基因 cDNA 文库。 首先分别网格筛选确定扩增 VH 和 VL 基因片段的引物对, 以 cDNA 为模板扩增 VH和 VL 基因 片 段, 再以 它 们 为 模板分 别 扩增 VHlinker 与VLlinker, 用 SOEPCR 技术将它们拼接成 scFv,再引入酶切位点 Sfi I 和 Not I, 胶回收 PCR 产物获得 scFv。 将 scFv 基因克隆入噬菌粒载体 pCANTAB5E 后电转入 Ecoli TG1。 PCR 法鉴定抗体基因插入率, 1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆酶切产物。 结果食管癌周围淋巴结的提取总 RNA 琼脂糖电泳结果中可见清晰的28S、 18S 条带; VH 基因的大小约为 450bp,VL 基因为 350bp,组装后的 scFv 基因约为 850bp。 PCR 连接产物的转化效率为2×107cfu/μg, scFv 的阳性插入率为 91.7%(22/24)。 结论食管癌相关的人源单链抗体基因文库的构建为进一步筛选单链抗体库奠定了基础。 【关键词】 噬菌体抗体库; 单链抗体; 食管癌; 基因工程抗体 1 材料和方法

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