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188宝金博页面版: 抗寒SiPEBP基因表达载体构建及转化水稻的研究

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内容提示: 新疆农业科学Xinjiang Agricultural Sciences2013,50( 9) : 1591 - 1597doi:10. 6048 /j. issn. 1001 - 4330. 2013. 09. 004抗寒 SiPEBP 基因表达载体构建及转化水稻的研究张燕红( 1. 新疆农业科学院核技术生物技术研究所,乌鲁木齐1,王奉斌1,2,袁 杰1,赵志强1,布哈丽且木· 阿布力孜830091; 2. 新疆农业科学院温宿水稻试验站,新疆温宿1,文孝荣2843000)摘要 :【目的】构建抗潮霉素标记基因的雪莲抗寒 SiPEBP 基因植物表达载体,转化新疆粳稻, 为提高水稻的抗寒性奠定基础。 【方法】用 PCR 方法扩增目的基因,连接到 pMD19 - T Vector 载体上,测序验证,经 BamHⅠ和 SacⅠ 双酶切,将目...

文档格式:PDF | 页数:7 | 浏览次数:26 | 上传日期:2014-02-09 04:52:58 | 文档星级:
新疆农业科学Xinjiang Agricultural Sciences2013,50( 9) : 1591 - 1597doi:10. 6048 /j. issn. 1001 - 4330. 2013. 09. 004抗寒 SiPEBP 基因表达载体构建及转化水稻的研究张燕红( 1. 新疆农业科学院核技术生物技术研究所,乌鲁木齐1,王奉斌1,2,袁 杰1,赵志强1,布哈丽且木· 阿布力孜830091; 2. 新疆农业科学院温宿水稻试验站,新疆温宿1,文孝荣2843000)摘要 :【目的】构建抗潮霉素标记基因的雪莲抗寒 SiPEBP 基因植物表达载体,转化新疆粳稻, 为提高水稻的抗寒性奠定基础。 【方法】用 PCR 方法扩增目的基因,连接到 pMD19 - T Vector 载体上,测序验证,经 BamHⅠ和 SacⅠ 双酶切,将目 的片段连接到 pMDC32 表达载体上, 通过冻融法将该载体导入根癌农杆菌 EHA105 中,通过根癌农杆菌介导法转化新疆粳稻品种秋田小町。 【结果】得到抗寒基因 SiPEBP, 并构建成 SiPEBP 植物表达载体。 获得了具有潮霉素抗性的水稻愈伤组织, 经 PCR 技术鉴定, 目 的基因已整合到水稻基因组中。【结论】获得了转雪莲抗寒 SiPEBP 基因的水稻植株,这对深入研究该基因在水稻中的功能并探讨其在水稻耐冷分子育种中的应用价值奠定了基础。关键词: 粳稻;SiPEBP 基因;载体构建;遗传转化中图分类号:S511;S503. 4文献标识码:A文章编号:1001 - 4330( 2013) 09 - 1591 - 07收稿日 期:2013 - 06 - 07基金项目 : 新疆维吾尔自治区自然科学基金项目 ( 2011211B39)作者简介: 张燕红( 1982 - ) ,女,助理研究员,研究方向为水稻遗传育种,( E - mail) zhangyanhong9527@ 163. com通讯作者: 王奉斌( 1968 - ) ,男,高级农艺师,研究方向为水稻遗传育种与栽培,( E - mail) xjnkywfb@ 163. comExpression Vector Construction and genetic Transformation ofAntifreeze SiPEBP gene in RiceZHANG Yan - hong1, WANG Feng - bin1, 2,YUAN Jie1, ZHAO zhi - qiang1,Buhaliqiemu Abulizi1, WEN Xiao - rong2( Research Institute of Nuclear and Biological Technologies, Xinjiang Academy of Agricultural Sciences,Urumqi 830091,China;2. Rice Experimental Station in Wensu County, Xinjiang Academy of Agricultural Sci-ences,Wensu Xinjiang 843000,China)Abstract : 【Objective】In order to enhance the freezing tolerance of rice, a hygromycin - resistant plantexpression vector of SiPEBP gene was constructed and transformed into Xinjiang Japonica rice. 【Method】Thetarget gene was amplified form Saussurea involucrate Kar. & kir by PCR and constructed to pMD19 - T Vector.After BamHI and sacI digestion, the target gene was sub - cloned to PMDC32 expression vector. The recombi-nant plasmid was then transfected Agrobacterium tumefaciens EHA105 using freeze - thaw method. Finely, theAgrobacterium tumefaciens containing recombinant plasmid was transformed inti Xinjiang Japonica rice varietyQiutian - xiaoding. 【Result】As the result,SiPEBP plant expression vector was obtained and the hygromycin- resistant callus of rice was constructed. The SiPEBP gene was integrated into the rice genome identified byPCR.【Conclusion】This transgenic rice will be used for the study of the function and mechanism of SiPEBPgene and for the cold tolerance seedling of rice.Key words:Japonica rice;Saussurea involucrate PEBP gene; vector construction; genetic transformation.

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