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188宝金博页面版: 蛋白酶活力的测定 PDF

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内容提示: 1 蛋白酶活力的测定 1.1 原理 采用福林-酚试剂法。福林-酚试剂在碱性条件下可被酚类化合物还原呈蓝色(钼蓝和钨蓝混合物)由于蛋白质分子中有含酚基的氨基酸(如酪氨酸、色氨酸等)可使蛋白质及其水解产物呈上述反应。因此可利用此原理测定蛋白酶活力。通常以酪蛋白为底物在一定 pH 值和温度条件下同酶液反应经一段时间后终止酶促反应经离心或过滤除去酪蛋白筹沉淀物后取上清液用 Na2CO3 碱化再加入福林-酚试剂显色蓝色的深浅与滤液中生成产物酪氨酸量成正比;酪氨酸含量用分光光度计在 660nm 波长处测定从而计算出蛋白...

文档格式:PDF | 页数:4 | 浏览次数:876 | 上传日期:2012-12-24 00:28:55 | 文档星级:
1 蛋白酶活力的测定 1.1 原理 采用福林-酚试剂法。福林-酚试剂在碱性条件下可被酚类化合物还原呈蓝色(钼蓝和钨蓝混合物)由于蛋白质分子中有含酚基的氨基酸(如酪氨酸、色氨酸等)可使蛋白质及其水解产物呈上述反应。因此可利用此原理测定蛋白酶活力。通常以酪蛋白为底物在一定 pH 值和温度条件下同酶液反应经一段时间后终止酶促反应经离心或过滤除去酪蛋白筹沉淀物后取上清液用 Na2CO3 碱化再加入福林-酚试剂显色蓝色的深浅与滤液中生成产物酪氨酸量成正比;酪氨酸含量用分光光度计在 660nm 波长处测定从而计算出蛋白酶的活力。 1.2 试剂 1.2.l 福林-酚试剂 向 2000mL 的磨口回流瓶中加入 100g 钨酸钠(Na2WO4?2H2O)、25g 钼酸钠及700mL 的去离子水再加入 50mL85%的磷酸及浓盐酸 l00mL充分混合后接上回流冷凝管以文火回流 10h结束后再加入 150g 的硫酸锂(LiSO4)、50mL 去离子水及数滴溴水再继续沸腾 15min以驱除过量的溴冷却后滤液呈黄绿色(如仍呈绿色需再重复滴加溴水的步骤)加去离子水定容至 1000mL 乱过滤滤液置于棕色试剂瓶中贮于冰箱中可长期保存备用。此溶液使用时可按 1:3 比例用去离子水稀释。 1.2.2 0.4mol/L 三氯乙酸(TCA)溶液 精确称取 TCA65.4g加去离子水定容至1000mL。

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