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    188宝金博页面版: 重楼属植物遗传多样性的RSAP标记

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    内容提示： 重楼属植物遗传多样性的 RSAP 标记辛本华1， 田孟良（ 1． 四川 农业大学 农学院， 四川 成都 611130；2. 雅安三九中药材科技产业化公司 ， 四川 雅安 625000）1*， 吴镔锣1， 王巧2， 杨华1［摘要］目 的： 研究重楼属植物 DNA 指纹图谱，初步探讨 RSAP 分子标记技术在重楼属植物遗传多样性研究上的应用。方法： 采用限制性位点扩增多态性（ restriction site amplification polymorphism，RSAP） 技术对重楼属 8 个种进行基因组 DNA 多态性分析。 结果： 用 10 条 RSAP 引物即选出 18 对引物组合构建了 8 个种的 DNA 指纹图谱。 通过遗传距离构建系统进化树， 重楼属 8 个种的进化关系得到了...

    文档格式：PDF | 页数：3 | 浏览次数：14 | 上传日期：2013-04-09 16:57:30 | 文档星级：
    重楼属植物遗传多样性的 RSAP 标记辛本华1， 田孟良（ 1． 四川 农业大学 农学院， 四川 成都 611130；2. 雅安三九中药材科技产业化公司 ， 四川 雅安 625000）1*， 吴镔锣1， 王巧2， 杨华1［摘要］目 的： 研究重楼属植物 DNA 指纹图谱，初步探讨 RSAP 分子标记技术在重楼属植物遗传多样性研究上的应用。方法： 采用限制性位点扩增多态性（ restriction site amplification polymorphism，RSAP） 技术对重楼属 8 个种进行基因组 DNA 多态性分析。 结果： 用 10 条 RSAP 引物即选出 18 对引物组合构建了 8 个种的 DNA 指纹图谱。 通过遗传距离构建系统进化树， 重楼属 8 个种的进化关系得到了很好的分辨。 结论：RSAP 标记能够对重楼属植物进行准确的分子鉴定， 为重楼属中药材的种类鉴定和种间的分类地位提供分子生物学依据。［关键词］重楼；RSAP；遗传多样性［稿件编号］20110509004［基金项目］四川省科技支撑计划项目 （ 2011BAI13B02- 6）［通信作者］*田孟良，Tel：13881636473，E-mail： secondat@ qq. com重楼属 Paris 植物隶属于延龄草科 Trillaceae，全世界重楼属共 24 个种，分布在远东地区的热带及温带地区， 我国有 19 种， 以西南各省区居多。 重楼又名灯台七、 王孙、 蚤休、 七叶一枝花等［1］， 具有清热解毒，消肿止痛，凉肝定惊的功效，用于疔疮痈肿，咽喉肿痛，蛇虫咬伤， 跌扑伤痛， 惊风抽搐［2］。 该属植物分类学地位至今未有定论， 不同种之间有的外部特征较相似， 形态有重叠或交叉， 容易混淆［3］。近年来， 商品重楼需求量增大， 野生资源急剧减少，商品药材基原混乱， 药材品质不一， 寻找鉴定重楼药材的有效方法迫在眉睫RSAP （restriction［4］。siteamplificationpolymor-phism） 即限制性位点扩增多态性， 是通过简单 PCR反应，针对基因组内普遍存在的酶切位点来产生多态性标记。 其 RSAP 的引 物是依据 SRAP（ sequencerelated amplified polymorphism） （ 序列相关扩增多态性） 的引物设计原理建立。 使用 1 对 17 ～ 18 个碱基组成的引物序列，5'端前 12 ～ 14 个碱基为没有特殊组成的填充序列，3'端的选择性碱基为 4 ～ 6 个碱基组成的限制性内切酶的酶切位点序列。 依据引物内3'端选择性碱基， 即基因组内限制性内切酶位点的不同而产生多态性，具有成本低、结果稳定可靠等优［5］等首先在辣椒中建立， 同时点。 该技术由杜晓华在苦 瓜和 水稻 上 作了 验证， 乔利 仙 进一步 应 用RSAP 标记对紫菜进行了遗传多态性分析［7］建立了红花檵木的 RSAP 反应体系。 张明科对 RSAP 标记技术新引物设计及其反应体系的优化研究。 但 RSAP 标记用于药用植物的遗传多样性分［6］， 李炎林［8］析尚无报道。本实验采用 RSAP 分子标记技术对产于四川邛崃山系的重楼属植物 7 个种以及云南滇重楼共 8 个种进行遗传多态性分析， 为明确重楼属植物分类学地位、保护和合理利用野生重楼资源、鉴定商品重楼基原种提供理论依据， 同时为重楼规范化种植基地符合药典标准的种苗快速鉴定提供技术。1材料与方法1. 1重楼属植物2010 年 5 月 于四川宝兴至甘孜泸定段海拔 2 000 ～ 2 800 m 林中荫湿处采集完整开花植株，连同土壤用湿毛巾包裹，带回四川农业大学农学院人工气候室按野生条件进行栽培。 供试材料编号、种名及产地见表 1，所有材料均由四川农业大学杨瑞武教授鉴定。表 1供试材料及来源No.重楼属植物各种名称产地P1P2P3P4P5P6P7P8狭叶重楼 Paris polyphylla var. stenophylla球药隔重楼 P. fargesii var. fargesii黑籽重楼 P. thibetica var. thibetica五指连 P. axialis var. axialis滇重楼 P. Polyphylla var. yunnanensis卵叶重楼 P. delavayi var. petiolata长药隔重楼 P. polyphylla var. pseudothibetica七叶一枝花 P. polyphylla var. chinensis四川宝兴四川泸定四川宝兴四川天全云南丽江四川宝兴四川宝兴四川宝兴注： P5 采自 云南丽江，2008 年 4 月 移栽至四川宝兴。·5243·第 36 卷第 24 期2011 年 12 月Vol. 36， Issue24December， 2011

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