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    188宝金博页面版: 重组慢病毒介导的OPCML基因的体外转导及其对卵巢上皮性癌细胞的抑制作用

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    内容提示： 中华妇产科 杂志 2006 年 5 月第 4l 卷第 5 期Chin J Obste! Gynecol ，May 2006，Vo1 ． 41， No． 5 木 重组慢病毒介导的 OPCML 基因的体外 转导及其对卵巢上皮性 癌 细胞 的抑制作用 姚德生李力Kenneth Garson Barbara C． Vanderhyden 【 摘要】 目的探讨重组慢病毒介导的体外转导 OPCML 基因的可行性及其对卵巢上皮性癌 ( 卵巢癌) 细胞的抑制作用。方法采用 PCR 技术 ， 用基因特异性引物将 OPCML 基因的 cDNA 从 CD1小 鼠脑组织 中扩增 ， 并将 OPCML 基 因克 隆到慢病 毒载体表 达质粒 pWPI． GFP 上 ， 构建 慢病毒 载 体表 达 质 粒 pWPI·OPCML ； 将 pWPI·OPCM...

    文档格式：PDF | 页数：6 | 浏览次数：9 | 上传日期：2013-06-23 09:05:20 | 文档星级：
    中华妇产科 杂志 2006 年 5 月第 4l 卷第 5 期Chin J Obste! Gynecol ，May 2006，Vo1 ． 41， No． 5 木 重组慢病毒介导的 OPCML 基因的体外 转导及其对卵巢上皮性 癌 细胞 的抑制作用 姚德生李力Kenneth Garson Barbara C． Vanderhyden 【 摘要】 目的探讨重组慢病毒介导的体外转导 OPCML 基因的可行性及其对卵巢上皮性癌 ( 卵巢癌) 细胞的抑制作用。方法采用 PCR 技术 ， 用基因特异性引物将 OPCML 基因的 cDNA 从 CD1小 鼠脑组织 中扩增 ， 并将 OPCML 基 因克 隆到慢病 毒载体表 达质粒 pWPI． GFP 上 ， 构建 慢病毒 载 体表 达 质 粒 pWPI·OPCML ； 将 pWPI·OPCML 或 pWPI． GFP ( 空 载 体 对 照 ) 质 粒 和 包 装 质 粒 pCMVdR8． 74、 pMDG 共同转 染人胚胎 肾上皮 细胞 系 293T 细胞 ， 获得 携带 OPCML 和 绿色 荧光 蛋 白 ( GFP) 基 因的重组慢病 毒 WPI·OPCML 或仅 携带 GFP 基 因 的重组 慢病 毒 WPI． GF P； 用重 组慢 病 毒 WPI·OPCML 和 WPI— GFP 分别转导靶细胞， 即人卵巢癌细胞系 A2780 、 OCC1 细胞和小鼠正常卵巢上 皮细胞系 CD1 细胞， 以未转染任何基因者为空白对照。通过细胞增殖实验、 细胞聚合力实验、 细胞周 期分析和体内成瘤实验观察 OPCML 基因对卵巢癌细胞的抑制作用。结果 组慢病毒高效地转导入靶细胞 ， 转导效率几乎达 100％ ， 并稳定表达； 蛋白印迹法检测显示 ， 靶细胞中 OPCML 和 GFP 蛋白均有表达。( 2) 细胞增殖实验显示， A2780 细胞 中， 转导 OPCML 基 因72 h 后的 A2780／ OPCML 细胞 为(7． 6 ± 1． 0) × 10 个 ， 明显少 于未 转导 基 因的 A2780 细 胞或仅 转 导空 载体 的 A2780／ pWPI 细胞[ 分别为(20． 0 ±2． 6) × 10 和( 18． 1± 1． 7) × 10 个； P < 0． 01] ； 但 OCC1和 CD1 细 胞中， OPCML 基因对细胞的增殖无明显的影响(P >0． 05) 。( 3) 细胞周期分析显示 ， OPCML 基因对 A2780 细胞的细胞周期有明显的阻滞作用( 转导前、 后 G。～G 期细胞分别为67％、 75％； P <0． 05) ， 但对 OCC1、 CD1细胞则无明显阻滞作用(P >0． 05) 。(4) 细胞聚合力实验显示， 与空载体对照相比， OPCML 基因能明显增 强细胞的黏附力( P < 0． 05) 。(5) 移植瘤实验显示 ， 将 A2780／ OPCML 细胞注 射 到裸 鼠皮 下 ， 4 只裸 鼠中仅 1 只裸 鼠有 肿瘤生 长 ， 其肿 瘤重量 为 10 mg ， 显 著低 于注射 A2780、 A2780／ pWPI 细胞的裸鼠[各 4 只裸鼠均有肿瘤生长，其肿瘤重量分别为(280 ± 53) 及 (677 ± 323) mg； P < 0． 01] 。免疫组化法检测显示， 肿瘤组织中 OPCML 蛋白有表达。结论基因的工具 ， 具有高效性， 同时能使 目的基因达到持续稳定的表达。OPCML 基因能够增加 A2780 细 胞的黏附能力， 抑制 A2780 细胞的增殖和体内成瘤， 提示 OPCML 基因可能是一个新的抑癌基因。 【 关键词】 慢病毒属； 卵巢肿瘤； 细胞黏附分子； 转染 ( 1)OPCML 基因能被重 用重组的慢病毒载体作为转 o PC M cell s Ontology ， A2~liated Cancer Hospital ，Guangxi Medical University ． Nanning 53oo2i ， China 【 Abstract】 0 bj ective To study the inhibition of OPCML on ovar i an cancer cell lines using a l entiviral vector system for ef f ici ent gene transduction． M ethods by PCR from CD 1 muri ne brain cD NA using gene specif i c pr i mers，a nd subcl oned i nto the lenti vi ra l vector ． g ene tra nsfer red by recombinant l entivi r uses in vi tr o and i Is inhi biti on to ovar i an cancer O D ． sheng #．L I Li． Kenneth Carson ．B0rbara C Vanderhydera Department of Gyn e cologicaZ T he muri ne 0 PCM L cD NA was ampl if i ed pWPI -GF P ．to generate the l entiv iral expression vector ． pW PI OPC M L produced by 293 T cell s followi ng the co·transfection of pWPI— OPCM L ，wi th the packaging plasmids pC MV · R ecombi nant lentivi ruses were dR 8． 74 and pM D G ． T he resulti ng recombinant lentiviruses which carri ed OPCM L or control vi ruses f only carrying GFP ) ．were then used to infect the human ovar i an cancer cell lines A2780 and OCC 1 in addition to normal CD 1 mouse ovari an surface epitheli al cell s． T he i nfected cell s were then character i zed by cel l 作者单位 ： 530021南宁 ， 广西医科大学附属肿瘤 医院妇瘤科 ( 姚德生 、 李 力) ； Ottawa Cancer Center，University of Ottawa( Kenne~ Garson， Barbara C． Vanderhyden) ‘ 为“ 快速通 道”发表的论文 ·333 · ．基 础 研 究 ． 维普资讯 http://www.cqvip.com

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