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    188宝金博页面版: 高考生物一轮复习第10单元解惑练4PCR技术拓展应用

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    内容提示： 练 解惑练 4 PCR 技术拓展应用 应用 1：反向 PCR 测定未知 DNA 区域 当 DNA 的某些序列已知，而需要扩增已知序列两端的未知序列时，可采用反向 PCR 技术。原理：用限制性内切核酸酶切割该 DNA，随后使用 DNA 连接酶将获得的酶切产物环化，这样就获得了已知序列两侧携带有未知序列的环状 DNA 分子。以该已知序列为模板设计一对相反方向的特异性引物，该引物对已知序列反向，但对未知序列却是相向的，从而得以扩增出未知序列。 应用 2：PCR 定点突变技术 该技术要使用四条引物。其中引物 2 和 3 的突起处代表与模板链不能互补的突变位点，而这两条引物有部分碱基(包括突变...

    文档格式：DOCX | 页数：6 | 浏览次数：2 | 上传日期：2026-03-19 22:47:48 | 文档星级：
    练 解惑练 4 PCR 技术拓展应用 应用 1：反向 PCR 测定未知 DNA 区域 当 DNA 的某些序列已知，而需要扩增已知序列两端的未知序列时，可采用反向 PCR 技术。原理：用限制性内切核酸酶切割该 DNA，随后使用 DNA 连接酶将获得的酶切产物环化，这样就获得了已知序列两侧携带有未知序列的环状 DNA 分子。以该已知序列为模板设计一对相反方向的特异性引物，该引物对已知序列反向，但对未知序列却是相向的，从而得以扩增出未知序列。 应用 2：PCR 定点突变技术 该技术要使用四条引物。其中引物 2 和 3 的突起处代表与模板链不能互补的突变位点，而这两条引物有部分碱基(包括突变位点)是可以互补的。因此，分别利用引物 1 和 2，引物 3和 4 进行 PCR 后，得到的 DNA 片段可以通过引物 2 和 3 互补的碱基杂交在一起，再在 DNA聚合酶的作用下延伸，就能成为一条完整的 DNA 片段。最后，用引物 1 和 4 进行扩增得到含有突变位点的 DNA 片段。通过测序可以检验定点突变是否成功。 应用 3：(实时)荧光定量 PCR(RT－PCR) 先从样本中提取 RNA，RNA 中可能有新冠病毒的 RNA，同时也存在很多采样患者的组织和存在于采样部位的微生物的 RNA。通过逆转录酶将样本的 RNA 逆转录为 cDNA，并进行 PCR 扩增，在 PCR 反应体系中，包含一对特异性引物以及一个 Taqman 探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；若反应体系存在靶序列，PCR 反应时探针与模板结合，DNA 聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针降解，报告基团与淬灭基团分离，发出荧光。每扩增一条 DNA 链，就有一个荧光分子产生。荧光定量 PCR 仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数(Ct 值)与病毒核酸浓度有关，病毒核酸浓度越高，Ct 值越小(如图)。

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