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188宝金博页面版: 四环素人工抗原的合成与鉴定_30068

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内容提示: 四环素人工抗原的合成与鉴定 [标签:来源] 作者肖理文, 袁耀萍, 郗日沫, 孙秀兰, 王洪新 【摘要】 目的: 对牛血清白蛋白进行羧基化和四环素的衍生化, 制备更高偶联比的四环素TC-牛血清白蛋白BSA偶联物并进行鉴定。方法: 四环素通过两步衍生化后, 形成一种活泼的重氮化中间产物, 与羧基化的 BSA 上的表位羧基反应, 合成 TC-BSA 偶联物。 结果: HPLC-MASS 图谱鉴定表明成功的制备了四环素衍生物, 红外及紫外扫描图谱表明, 偶联成功, 计算得偶联比分别为 7∶1 和 11∶1。 结论: BSA 经过羧基化后的偶联效果明显...

文档格式:PDF | 页数:5 | 浏览次数:46 | 上传日期:2012-04-19 03:09:04 | 文档星级:
四环素人工抗原的合成与鉴定 [标签:来源] 作者肖理文, 袁耀萍, 郗日沫, 孙秀兰, 王洪新 【摘要】 目的: 对牛血清白蛋白进行羧基化和四环素的衍生化, 制备更高偶联比的四环素TC-牛血清白蛋白BSA偶联物并进行鉴定。方法: 四环素通过两步衍生化后, 形成一种活泼的重氮化中间产物, 与羧基化的 BSA 上的表位羧基反应, 合成 TC-BSA 偶联物。 结果: HPLC-MASS 图谱鉴定表明成功的制备了四环素衍生物, 红外及紫外扫描图谱表明, 偶联成功, 计算得偶联比分别为 7∶1 和 11∶1。 结论: BSA 经过羧基化后的偶联效果明显好于未经羧基化的 BSA, 并成功制备了 TC-BSA 人工抗原。 【关键词】 四环素TC 羧基化 偶联 人工抗原 四环素类抗生素 TCs 是一类由链霉菌产生的宽谱抗生素, 对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌均具有较强的抵抗能力。 因其高效、 便宜且能直接通过口服起效的特性, 被广泛应运于禽畜养殖业中, 既能预防治疗疾病, 也能起促进生长的作用。 1998 年, 欧洲动物卫生联盟的一份调查显示, 在欧盟 15 国中, 四环素类抗生素的使用量占了整个禽畜业中抗生素使用量的 651 。 在国内, 四环素类抗生素也同样被大量广泛的用于禽畜养殖业中。 人长期低剂量的摄入四环素类抗生素可能会产生各种慢性和蓄积性疾病, 主要表现在对胃、 肠、 肝脏的损害, 以及牙齿的染色, 还会造成过敏反应、 二重感染、 致畸胎等, 同时可能会导致人体肠道中菌群平衡的失调以及耐药性细菌的产生。 为此, 我国规定畜禽肉中四环素的最大残留量不得超过 100 ppb, 禽蛋中不超过 200 ppb2 。 目前, 我国用于检测四环素类抗生素的 ELISA 试剂盒主要靠国外进口, 价格昂贵, 因此急需开发拥有自主知识产权的试剂盒或免疫传感器, 而其关键之一就是制备具有优良免疫原性的四环素完全抗原。 我们通过对载体蛋白 BSA 进行羧基化, 大大提高了其表面活性羧基的数量, 同时对四环素进行衍生化, 获得活泼的重氮化中间产物, 再与 BSA 及 sBSA 偶联, 制备四环素完全抗原并对其进行比较。 1 材料和方法 1.1 材料 UV-2100 紫外扫描仪为北京瑞利公司产品; Nicolet Nexus 傅立叶变换红外光谱仪为美国热电公司产品; WATERS Platform ZMD4000 型高效液相色谱质谱联用仪为美国WATERS 公司产品; 950 mL/L 盐酸四环素标准品(TC.HCl)购于中国药品生物制品检定所; 牛血清白蛋白BSA为北京博奥生物技术有限公司 Sigma 公司进口分装; 丁二酸酐Succinic

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